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舜宇恒平符合國標的三聚氰胺快速液相色譜檢測法
點擊次數：3048 更新時間：2009-01-22
raybet中国下载按照GB/T 22400-2008 《原料乳中三聚氰胺快速檢測 液相色譜法》，對鮮牛奶中三聚氰胺進行快速檢測，經優(you) 化色譜條件，三聚氰胺的出峰時間在7min左右，並能與(yu) 雜質峰達到基線分離，完整分析一個(ge) 樣品（包括前處理）的整個(ge) 實驗過程在20min以內(nei) 。
1.儀器與試劑
LC1620液相色譜儀（含UV1620紫外-可見檢測器1台，P1620高壓恒流泵1台，raybet中国下载）；FA2004電子分析天平（raybet中国下载）；三聚氰胺標準品（>99%，上海安譜）；磷酸二氫鉀（分析純）；磷酸（分析純）、乙腈（色譜純，美國Tedia）、二次蒸餾水。
2.標準品溶液配製
精密稱取三聚氰胺標準品，溶於水，配製成1.0mg/mL的標準儲備液，於4℃避光保存。根據實驗需要，用流動相逐級稀釋成適當濃度的標準工作液。
3.樣品前處理
稱取15g樣品於50ml具塞離心管中，加入乙腈30ml，劇烈震蕩6min，加水至滿容刻度，充分混勻後靜置3min，取上清液，0.22um濾膜過濾，作為HPLC測定溶液。
4.色譜條件：
色譜柱：Venusil SCX 5μm（ID4.6mm×250mm）
流動相：乙腈/緩衝鹽=30/70（緩衝鹽：80mM磷酸緩衝液，用磷酸調pH3.0）
流速：1.5ml/min
波長：240nm
進樣量：20μl
5.精密度實驗
取濃度為2μg/mL三聚氰胺標準工作液，按上述色譜條件，連續進樣6次，以各成分峰麵積計算RSD（%），所得結果如表1所示：保留時間相對標準偏差（RSD）為0.10％，峰麵積RSD為0.69％。
表1 精密度實驗
| NO. | Retention time（min） | Peak High | Peak Area |
| 1 | 7.240 | 1060 | 9854.7 |
| 2 | 7.232 | 1062 | 9815.3 |
| 3 | 7.223 | 1043 | 9805.0 |
| 4 | 7.223 | 1088 | 9869.5 |
| 5 | 7.223 | 1052 | 9681.4 |
| 6 | 7.223 | 1070 | 9841.3 |
| RSD（%） | 0.10 | 0.96 | 0.69 |
圖1 三聚氰胺標準品色譜圖
6.標準曲線
1） 配置濃度分別為0.2、0.5、2.0、5.0、20.0、50.0μg/mL的三聚氰胺標準工作液。將以上6種標準工作液在上述色譜條件下按濃度由低至高進樣。以對照品濃度（橫坐標X軸，μg/mL）對峰麵積（縱坐標Y軸）進行線性回歸，求算標準曲線，結果如下：
y = 4810.3x + 137.52 r = 0.9999
2） 配置濃度分別為0.005、0.01、0.02、0.5、0.2μg/mL的三聚氰胺標準工作液。將以上5種標準工作液在上述色譜條件下按濃度由低至高進樣。以對照品濃度（橫坐標X軸，μg/mL）對峰麵積（縱坐標Y軸）進行線性回歸，求算標準曲線，結果如下：
y = 4116.2x + 17.618 r＝0.9992
7.加樣回收率和重現性實驗
取已知三聚氰胺含量的牛奶樣品，加入一定量的標準儲備液，按“樣品前處理” 操作，平行製備3份，得到樣品溶液後按上述色譜條件進樣分析，得到加樣回收率及重現性結果，三次測定RSD為1.89％，加樣回收率為100.6％。
圖2 空白牛奶樣品色譜圖
圖3 加標牛奶樣品色譜圖
8.檢測限及定量限
依據噪聲值，按3倍信噪比，計算三聚氰胺的理論檢出限，為0.04 mg/kg。
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